分子生物学的研究方法及其应用

分子生物学的研究方法在现代医学，法医学，以及生物学的重要作用。 由于在DNA和RNA的研究进展，人是能够探索生物体的基因组中确定的病原体，以识别所期望的核酸中的酸等的混合物

分子生物学的方法。 这是什么？

早在科学家的70-80s是第一个破译 人类基因组。 这一事件推动了基因工程和分子生物学的发展。 研究DNA和RNA的特性意味着现在可以使用这些核酸用于疾病诊断，研究基因的目的。

DNA和RNA的制备

分子生物学 诊断方法 需要原料：经常此 核酸。 有几种方法可以选择：生物的细胞中这些物质。 每个人都有其优点和缺点，并且应该在选择以纯的形式分离核酸的方法时，必须考虑。

1. Marmur制备的DNA。 该方法包括在治疗的醇物质混合物，沉淀物所得纯DNA。 这种方法的缺点是使用腐蚀性物质，苯酚和氯仿的。

2.分离在悬臂的DNA。 在此使用的主要物质 - 是硫氰酸胍（异硫氰酸胍）。 它促进沉积脱氧核糖核酸上专门底物，从它可以通过一个特殊的缓冲器来随后收集。 然而异硫氰酸胍 - 是TCP的抑制剂，并且，即使一小部分被存放在DNA可以影响聚合酶链式反应，与核酸工作时这是重要的过程。

3.沉淀的杂质。 该方法不同于以前的，所述分子本身不沉积dehoksiribonukleinovoy酸和杂质。 要做到这一点，使用离子交换剂。 其缺点是，并不是所有的物质可以摆平。

4.普查。 这种方法在使用的情况下，当你不需要有关于DNA分子的结构，并且需要得到一些统计数据的准确信息。 其原因是，核酸结构可以处理洗涤剂，特别是碱时被损坏。

研究方法分类

所有研究分子生物学方法分为三大类：

1.扩增（使用多个酶）。 这包括PCR - 聚合酶链反应，这在许多的诊断方法中起着重要的作用。

2. Neamplifikatsionnye。 这组方法是直接与核酸的混合物的工作相关联。 实例3种印迹，原位杂交等

3.方法基于这样的认识，从所述探针分子，其结合到一个特定的DNA或RNA探针的信号的。 实施例 - 杂交系统HYBRIDE捕捉系统溶液（HC2）。

可在分子生物学的研究方法来使用的酶

许多分子诊断技术包括使用的宽范围的酶。 下面是最常用的：

1.限制酶 - “切”的DNA分子，以必要的零件。

2. DNA聚合酶 - 合成双链脱氧核糖核酸分子。

3.逆转录酶（逆转录酶） - 用于从RNA模板合成DNA。

4. DNA连接酶 - 负责的核苷酸之间磷酸二酯键的形成。

5.核酸外切酶 - 从脱氧核糖核酸分子的端部去除核苷酸。

PCR - 扩增DNA的基本方法

聚合酶链反应（PCR） 被广泛用于现代分子生物学。 该方法中，其中单个DNA分子能够获得副本（放大分子）的大量。

PCR的主要功能：

- 诊断疾病;

- 克隆的DNA片段，基因。

为了进行聚合酶链反应需要以下元件：初始DNA分子，热稳定的DNA聚合酶（Taq酶或PFU），脱氧核糖核苷酸磷酸盐（的氮碱源），引物（2引物1个的DNA分子）和本身的缓冲系统，其可进行所有的反应。

PCR包括三个步骤：变性，引物退火和延伸。

1.变性。 在94-95摄氏度proshodit的温度下断裂DNA的两条链之间的氢键，并且作为结果，我们得到两个单链分子。

2.退火的引物。 在50-60摄氏度的温度出现在根据互补的类型的单链核酸分子的末端加入引物。

3.伸长率。 在72度的温度下合成的女儿双链脱氧核糖核酸分子。

DNA测序

分子生物学的研究方法往往需要核苷酸序列的知识脱氧核糖核酸的分子。 为了确定 遗传密码 测序。 未来的分子诊断将基于人类基因组序列的测定获得的知识。

以下类型的排序：

• 通过马克萨姆 - 吉尔伯特测序;
• Sanger测序;
• 焦磷酸测序;
• nanoporovoe测序。